Preuve moléculaire et virologique de l’activation virale de l’herpèsvirus humain intégré chromosomiquement A chez un patient présentant une immunodéficience combinée sévère liée au chromosome X

Nous ne savons pas si l’herpèsvirus humain intégré sur le plan chromosomique peut être activé avec des effets pathogènes sur le corps humain. Nous présentons des preuves moléculaires et virologiques de l’activation de ciHHV-A chez un patient présentant une immunodéficience combinée sévère liée à l’X des patients avec ciHHV-

ciHHV-, HHV-, X-SCID, syndrome hémophagocytaire, microangiopathie thrombotiqueVoir le commentaire éditorial de Flamand sur les pages -Human herpesvirus HHV- est un virus de l’ADN omniprésent qui est l’agent causal de Roseola infantum, et infecte les individus par années Après infection primaire, HHV- établit un état latent chez l’hôte Il y a des espèces distinctes, HHV-A et HHV-B La plupart des infections à HHV-B sont causées par HHV-B, alors que HHV-A est moins fréquente HHV-ciHHV- est intégré au chromosome l’état dans lequel HHV-HHV-A ou HHV-B est intégré dans le génome de la lignée germinale de l’hôte, et il est transmis verticalement de façon mendélienne Bien que le CIHHV affecte environ% de la population générale, il est généralement considéré comme non pathogène Cependant, il n’est pas clair si CiHHV- peut être activé avec des effets pathogènes sur le corps humain Immunodéficience combinée sévère SCID est un groupe de troubles génétiques qui résultent en une absence combinée d’immunité aux lymphocytes T et B Il est caractérisé b y infections potentiellement mortelles au cours de la première année de vie sauf si traitées, généralement avec greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT X liée immunodéficience sévère X-SCID résulte d’une mutation dans le récepteur de l’interleukine, gène gamma ILRG sur le chromosome X Nous rencontré un garçon avec X-SCID chez qui le ciHHV-A était activé

RAPPORT DE CAS

Un garçon de mois a été hospitalisé pour des épisodes récurrents de fièvre, de toux, de diarrhée et de retard de croissance. Lors de son admission, une infection virale était suspectée et les soins de soutien n’amélioraient pas ses symptômes. Vingt jours après l’admission, légère pancytopénie leucocytaire L; taux d’hémoglobine, g / L; et la numération plaquettaire, × / L et les aminotransférases élevées et la ferritine étaient évidents aspartate aminotransférase, U / L; l’alanine aminotransférase, U / L; Données supplémentaires Une biopsie de la moelle osseuse a montré une condition hypocellulaire sans modification dysplasique, ainsi qu’une augmentation des phagocytes activés. Ces résultats suggèrent un syndrome hémophagocytaire HPS Une évaluation immunologique a révélé une absence de lymphocytes T et de faibles niveaux d’immunoglobulines. l’ILRG qui était compatible avec X-SCID La mère du patient était hétérozygote pour la même mutation, et aucune mutation de ce type n’a été détectée chez le père du patientUne recherche exhaustive d’un pathogène a identifié des niveaux élevés d’ADN HHV × copies / μg d’ADN dans son périphérique. Le traitement antiviral par le ganciclovir ou le foscarnet n’a pas réduit la charge virale, et la CIHHV était suspectée Nous avons détecté des taux élevés d’ADN HHV dans les ongles du patient, le sang périphérique du père et les follicules pileux du père ×, ×, × copies / μgDNA , respectivement, l’analyse d’hybridation fluorescente in situ des fibroblastes du patient et de son père cellules mononucléaires du sang périphérique Les PBMC ont confirmé l’intégration du HHV au chromosome chez les deux individus Figure; Les fibroblastes dérivés de la peau du patient A et les cellules mononucléées du sang périphérique du père B ont été cohybridés avec le jaune spécifique au HHV. Ces résultats suggèrent une transmission verticale de la lignée germinale. flèche et chromosome – sondes spécifiques flèches blanches HHV- intégration dans un seul des allèles chromosomiques a été montré dans les deux matériaux Dans les ensembles de A et B sont les images agrandies de données FISH cohybridized positivement avec les deux sondesFigure View largeDownload slideIntegration de l’herpèsvirus humain Les fibroblastes dérivés de la peau du patient A et les cellules mononucléées du sang périphérique du père B ont été cohybridés avec des flèches jaunes spécifiques de HHV et des sondes chromosomiques flèches blanches HHV- intégration dans un seul des allèles chromosomiques a été montré dans les deux matériaux Dans les ensembles de A et B sont les images agrandies des données FISH positivement cohybridized avec les deux sondes

Cependant, l’arrêt du traitement antiviral a conduit à une détérioration du HPS du patient. Aucun autre agent pathogène n’ayant été détecté, l’activation de HHV- était suspectée Pour confirmer cette suspicion, nous avons effectué des tests capables de détecter l’activation virale malgré la présence d’ADN HHV intégré. RT-PCR a été utilisé pour détecter l’ARN viral dans des échantillons de sang total. RT-PCR a été réalisée sur les gènes HHV-, le gène U ​​/ et le gène IE immédiat-IE, comme décrit précédemment Nous avons détecté ARN viral pour les deux gènes × copies / μg ARN pour U / et × copies / μg ARN pour IE Deuxièmement, immunocoloration a été utilisée pour détecter les antigènes IE dans un échantillon de moelle osseuse prélevé au moment de HPS Figure et données supplémentaires Last, HHV -A a été isolé à partir des PBMC du patient. Il a été cultivé avec des cellules de sang de cordon et sa présence a été confirmée par coloration immunofluorescente avec un anticorps monoclonal anti-HHV. Figure et données supplémentaires Figure View largeTélécharger slideHistologie et virus de l’herpès humain type HHV- immunocoloration A, coloration à l’hématoxyline et à l’éosine de la moelle osseuse B et C, Immunocoloration avec anticorps anti-HHVFigure View largeTélécharger diapositiveHistologie et type d’herpèsvirus humain Immunocoloration HHV A, coloration à l’hématoxyline et éosine de la moelle osseuse B et C, Immunocoloration avec un anticorps anti-HHVFigure View largeTélécharger la diapositiveImmunofluorescent coloration A, Isolement du virus confirmé avec un anticorps de type herpèsvirus anti-humain gp // B, U cultivé avec des cellules sanguines du cordon contrôle positif C, cellules sanguines du cordon seul contrôle négatifFigure View largeTéléchargement slideAmmunofluorescent coloration test A, isolement du virus confirmé avec un anticorps de type herpèsvirus anti-humain gp // B, U cultivé avec des cellules sanguines du cordon de contrôle positif C, des cellules sanguines du cordon seul contrôle négatif

Deux hypothèses ont été émises: Soit le patient avec ciHHV- a été infecté de novo avec HHV-, soit HHV- a été activé à partir du génome ciHHV- présent chez ce patient. Nous avons effectué une analyse séquentielle du gène HHV-IE, comme IE est variable et Les échantillons d’ADN de HHV-A isolé décrits ci-dessus, les ongles du patient, les follicules pileux de son père et les souches de laboratoire U et Z ont été amplifiés par PCR et séquencés car le HHV actif n’est pas présent dans la A notre grande surprise, les séquences et l’analyse phylogénétique subséquente ont révélé que le virus isolé était identique à la souche HHV-A intégrée originale présente à la fois chez le patient et chez les patients. et son père En outre, cette souche HHV-A était unique en ce sens qu’elle différait de toutes les autres souches HHV-. Données supplémentaires Ces résultats suggèrent que la souche HHV-A isolée inactivé par l’activation de la CIHHV-A Analyse d’autres gènes viraux gB, U et DR ont confirmé ces résultats La reprise du traitement médicamenteux antiviral avec la prednisolone a amélioré le HPS du patient Quand il a atteint l’âge de plusieurs mois, le patient Après la greffe, une microangiopathie thrombotique et une hémorragie gastro-intestinale se sont développées simultanément. Les titres d’ADN et d’ARN du HHV-A du patient ont augmenté et le HHV-A a été réisolé. Traitement anticoagulant et réduction progressive de la posologie du tacrolimus. Amélioration du TMA du patient Avec la reconstruction immunologique, les titres d’ADN et d’ARN du HHV-A du patient ont été réduits avec succès et, finalement, aucun HHV-A n’a été isolé à partir d’échantillons de sang subséquents.

DISCUSSION

Depuis la découverte de ciHHV-in, la question de savoir si le ciHHV- peut être activé à partir de son état intégré a été perpétuellement débattue Avec ce rapport de cas, nous fournissons les premières preuves moléculaires et virologiques de l’activation virale de ciHHV-A chez l’homme. corps Cette preuve comprend l’ARN viral et les antigènes détectés dans les PBMC et la moelle osseuse, ainsi que le HHV-A isolé des PBMC; Des séquences HHV-A intégrées dans les génomes du patient et de son père, identiques à celles du virus isolé; et le traitement antiviral et la reconstruction immunologique, qui ont été efficaces dans le traitement de ce ciHHV-AIn activé dans un effort pour comprendre la signification biologique de ciHHV-, réplication virale active de ciHHV- a été récemment démontré in vitro dans des conditions expérimentales spécifiques Cependant, seulement quelques études ont suggéré l’activation de ciHHV in vivo malgré une forte prévalence de ciHHV- environ% dans la population générale L’activation de ciHHV- in vivo a été précédemment rapportée chez des mères avec ciHHV- qui ont transmis l’infection à des nourrissons qui n’avaient pas CiHHV héréditaire Nos résultats concordent avec ces résultats, car nous démontrons clairement l’activation de HHV-A chez un patient qui a acquis CiHHV- via la transmission de la lignée germinale Nous supposons que la présence de X-SCID a permis une activation efficace de ciHHV-A, et ce phénomène a été détecté avec plusieurs stratégies techniques. De même, la RT-PCR et l’isolement viral ont montré une conversion à partir d’un sta En outre, ces techniques ont été utilisées pour tester des échantillons prélevés sur le père du patient. Nous avons pu déterminer qu’il était bien le transporteur CiHHV, mais il était HHV-A négatif. Cela suggère que X -SCID a influencé l’activation de ciHHV-A Parce que la prévalence de X-SCID est extrêmement faible autour de%, ce cas fournit des informations précieuses sur les personnes immunodéprimées et l’infection par HHV- Cependant, le mécanisme qui a déclenché l’activation et la réplication du CIHHV-A chez ce patient Des études complémentaires sur les patients atteints de CIHHV sont nécessaires pour déterminer les causes de l’activation de ce virus intégré latent. L’association entre HHV et HPS a déjà été rapportée , et un lien entre HHV et TMA a également été noté . Il est possible que l’activation de CiHHV-A chez notre patient était associée à HPS et TMA Nous avons noté que l’infection active HHV-A coïncidait avec l’apparition des symptômes et l’infection s contrôlé par un traitement antiviral Ceci suggère que HHV-A est pathogène, mais il reste à établir si HHV-A activé améliore les conditions pathologiques sous-jacentes, et si l’activation de ciHHV-A se produit de la même manière pour tous les individus infectésLatent HHV- réactivation survient chez% -% des receveurs pendant la GCSH, et notre rapport de cas est le premier à démontrer que l’activation de ciHHV-A se produit également pendant cette procédure. Il est possible que la présence de X-SCID permette l’activation virale. valider cette hypothèse Nous avons décrit le premier cas à fournir des preuves moléculaires et virologiques de l’activation de HHV-A chromosomiquement intégré dans le corps humain Cependant, notre rapport a des limites Nous ne savons toujours pas comment la production de virus a été déclenchée par un CIHHV-A ou comment la production du virus a affecté les symptômes du patient Malgré ces limites, sur la base de ce cas, nous émettons l’hypothèse qu’un immunodéficient p henotype en conjonction avec des systèmes de défense hôte non contrôlés permet l’activation de ciHHV-A Nous soutenons la recommandation qu’un programme de dépistage de la CIHHV chez les patients transplantés et les donneurs soit établi, et recommande que les patients CIHHV avec statut immunodéprimé comme l’immunodéficience primaire, humaine l’infection par le virus de l’immunodéficience ou la transplantation d’organes,

Remarques

Soutien financier Ce travail a été soutenu par le Ministère de la Santé, du Travail et du Bien-être du Japon H Shinko-Ippan- à H Ka, H Nanchi-Ippan- et H Nanchitou-Menneki-Ippan- to T Mo; la Société japonaise pour la promotion de la science à N I; Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels de conflits d’intérêts que les éditeurs considèrent comme pertinents pour les conflits d’intérêts potentiels. le contenu du manuscrit a été divulgué