Nouveaux tests et technologies prometteurs pour le diagnostic et la prise en charge des maladies infectieuses

Au cours de la première décennie du XX e siècle, nous avons vu l’achèvement du projet sur le génome humain et les progrès marqués du projet sur le microbiome humain. La vaste quantité de données générées par ces efforts combinés aux progrès des technologies biomédicales et moléculaires ont une multitude de tests et de technologies pouvant être utiles dans le diagnostic et la prise en charge des maladies infectieuses Ici, nous identifions plusieurs nouveaux tests et technologies qui sont récemment utilisés cliniquement ou qui ont un potentiel d’utilisation clinique dans un proche avenir. large et comprend des sujets tels que le marqueur sérum procalcitonine, le profil d’expression génique, la désorption laser assistée par matrice / ionisation spectrométrie de masse à temps de vol MALDI-TOF MS, et les acides nucléiques aptamers Principes qui sous-tendent chaque essai ou technologie, leurs applications cliniques, et les forces et limites potentielles sont traitées

procalcitonine, profilage d’expression génique, spectrométrie de masse, SM MALDI-TOF, sepsisLes progrès récents dans les domaines de l’immunologie, de la biologie moléculaire, de la bioinformatique et du génie biomédical ont mené à l’élaboration de nouveaux tests prometteurs pour le diagnostic et la gestion des maladies infectieuses. Pour le clinicien confronté à un patient souffrant d’une infection possible, un défi clé est de savoir quand fournir et quand refuser les médicaments antimicrobiens. Il est prouvé que le traitement antimicrobien efficace réduit la morbidité et la mortalité dans les infections sévères , alors que les antimicrobiens La résistance aux antimicrobiens est une menace majeure pour la santé publique qui a un impact économique important sur notre système de santé L’utilisation judicieuse des antibiotiques et les soins efficaces aux patients reposent sur la capacité de distinguer rapidement et avec précision les étiologies infectieuses et non infectieuses. la classe de pathoge n ou agent pathogène spécifique responsable de cette maladie, évaluer la gravité de la maladie, évaluer la réponse au traitement et définir la durée d’un traitement. Nous passons en revue les nouveaux tests et technologies prometteurs dans chacun de ces domaines. cette revue doit fournir un aperçu des principes qui sous-tendent chaque essai ou technique, le contexte clinique ou préclinique dans lequel ils ont été utilisés, et les limites potentielles de chaque modalité. Les tests et technologies examinés ici ont récemment été utilisés cliniquement ou devraient entrer en utilisation clinique dans un proche avenir

Procalcitonine

Une nouvelle approche pour estimer la probabilité d’un patient ayant une infection bactérienne, et surveiller la réponse à la thérapie antimicrobienne, est d’évaluer la réponse de l’hôte Traditionnellement, cela a été fait en surveillant les signes et symptômes cliniques, tels que le syndrome de réponse inflammatoire systémique SIRS. Les critères ont une faible sensibilité et / ou spécificité pour les infections bactériennes, et manquent de standardisation en pratique clinique Une approche plus récente consiste à mesurer les marqueurs sériques de l’infection Un marqueur qui a suscité un intérêt récent est la procalcitonine PCTPCT est libérée dans de multiples tissus corporels en réponse aux bactéries. infections par stimulation directe de cytokines bactériennes, telles que l’interleukine, le facteur de nécrose tumorale α et l’interleukine L’interféron γ, une cytokine libérée en réponse à des infections virales, bloque la régulation positive de la PCT, ce qui entraîne une spécificité plus élevée infection virale par rapport à d’autres marqueurs inflammatoires tels que Cr Protéine réactive Quantitativement, le PCT permet d’estimer le risque d’infections bactériennes sévères ou de maladies virales plus légères PCT augmente rapidement dans les heures suivant l’infection bactérienne PCT diminue quotidiennement d’environ% si le patient répond au traitement et que l’infection est bien contrôlée. La recherche récente s’est concentrée sur l’impact des tests PCT sur la gestion des patients et leurs résultats. Les études ont été réalisées dans différents contextes cliniques allant de la faible acuité dans les soins primaires à l’acuité Les protocoles PCT ont été adaptés en fonction de ces paramètres avec différentes fourchettes de PCT examinées dans Dans les milieux de faible acuité, le PCT a été utilisé pour guider la prescription initiale des antimicrobiens, tandis que dans les hôpitaux de soins intensifs. paramètres de la PCT ont été utilisés pour guider la durée du traitement: les antibiotiques ont été recommandés pour être arrêté une fois que les patients ont montré une réponse clinique et PCT a chuté à des valeurs normalesFifteen essais contrôlés randomisés, y compris & gt; Les protocoles PCT se sont révélés efficaces pour réduire l’exposition aux antibiotiques par rapport aux groupes standard dans tous les essais. Les recommandations du PCT ont abaissé les taux de prescription d’antibiotiques de% chez les patients en soins primaires, en cas d’urgence. La stratégie a également été jugée rentable dans un système de soins de santé nord-américain en supposant des coûts du PCT d’environ $ CA Aucun autre biomarqueur n’a été évalué dans des conditions aussi rigoureuses. Les études de «la vraie vie» ont montré que l’adhésion est un facteur crucial lorsque de tels protocoles sont mis en œuvre Également, des études qui ont utilisé le PCT pour augmenter l’antibiothérapie thérapie lorsque les valeurs n’ont pas baissé étaient décevantes

Tableau Efficacité et innocuité des protocoles de procalcitonine dans les essais contrôlés randomisés antérieurs Efficacité Sécurité Initiation des antibiotiques,% de durée des antibiotiques, Médiane IQR Exposition totale aux antibiotiques, Médiane de mortalité des IQR, Ajusté OU% CI P Valeur Traitement Failurea, Ajusté OU% CI P Valeur % vs% – vs – – vs – – – Soins primaires% vs% – vs – – vs – … … – Service d’urgence% vs% – vs – – vs – – – ICU% vs% – vs – – vs – – Diagnoses ARI supérieur% vs% – vs – – vs – … … – Communauté-

pneumonie acquise% vs% – vs – – vs – – – Ventilateur-

pneumonie associée% vs% – vs – – vs – – – Bronchite aiguë% vs% – vs – – vs – … … – Exacerbation de la BPCO% vs% – vs – – vs – – – Efficacité Sécurité Initiation des antibiotiques,% Durée de Antibiotiques, Médiane IQR Exposition Antibiotique Totale, Médiane IQR Mortalité, Ajusté OU% CI P Valeur Traitement Failurea, Ajusté OU% CI P Valeur Réglage Global% vs% – vs – – vs – – – Soins primaires% vs% – vs – – vs – … … – Service des urgences% vs% – vs – – vs – – – ICU% vs% – vs – – vs – – Diagnostic ARI supérieur% vs% – vs – – vs – … – Communauté-

pneumonie acquise% vs% – vs – – vs – – – Ventilateur-

pneumonie associée% vs% – vs – – vs – – – Bronchite aiguë% vs% – vs – – vs – … … – Exacerbation de BPCO% vs% – vs – – vs – – – Abréviations: ARI, infection respiratoire aiguë; MPOC, maladie pulmonaire obstructive chronique; Unité de soins intensifs Les échecs thérapeutiques ont été définis en fonction du contexte clinique: décès des soins primaires, hospitalisation, complications spécifiques des infections respiratoires aiguës, infection récurrente ou aggravée, gêne au jour, mortalité aux urgences, admission aux soins intensifs, réhospitalisation, complications, infection récidivante ou aggravée en quelques jours, la mortalité toutes causes confondues dans les unités de soins intensifs en jours Source: Adapté de Schuetz et al View LargeLes méthodes traditionnelles de culture, comme les hémocultures, mettent l’accent sur l’identification et la caractérisation des agents pathogènes. peut pas influencer la prise de décision clinique Un marqueur sanguin, tel que PCT, reflète la réponse d’un patient à l’infection et indirectement la gravité de l’infection. Le marqueur peut ne pas être capable d’identifier l’étiologie de l’infection, mais la probabilité augmente. niveaux de marqueur Le marqueur peut alors aider à éliminer l’infection et fournit des informations sur le patient Récupération Avec l’apparition de nouvelles méthodes microbiologiques permettant d’identifier rapidement les microorganismes les plus sensibles, comme indiqué ci-dessous, la PCT peut contribuer à accroître la spécificité en fournissant des informations sur la “pertinence” des résultats microbiologiques chez les patients.

Profil d’expression génique des leucocytes du sang périphérique

À la différence de la PCT, les profils d’expression génique mesurent simultanément l’expression d’un grand nombre de gènes pour générer un instantané de la fonction des cellules immunitaires de l’hôte. sont activés par différents ligands dérivés d’agents pathogènes Cela conduit à l’initiation d’ensembles distincts de programmes transcriptionnels. Le modèle résultant de l’expression génique peut être considéré comme une signature transcriptionnelle qui représente ou diagnostique un pathogène spécifique. Transcrits d’ARN provenant de cellules d’intérêt, le plus souvent des cellules sanguines périphériques Les microarrays sont la plateforme d’expression génique la plus utilisée dans les travaux cliniques et permettent l’analyse à l’échelle du génome. Un microréseau est un support solide auquel un ensemble de sondes oligonucléotidiques représentant un gène spécifique. les régions codantes sont fixées L’ARN est typiquement transcrit en ADNc ADN complémentaire, marqué par fluorescence et hybridé au réseau. La force du signal fluorescent généré par chaque sonde représente l’abondance relative du transcrit d’ARN correspondant. L’expression différentielle des gènes entre états, comme l’infection par rapport à la santé, ou infection bactérienne contre virale, peuvent alors être comparées Alors que les puces à ADN ont été le pilier du profilage de l’expression génique dans un passé récent, elles pourraient bientôt être remplacées par des technologies plus récentes telles que le séquençage d’ADNc à haut débit. Une partie du travail initial utilisant le profil d’expression génique des leucocytes du sang périphérique pour discriminer les infections bactériennes virales était récemment décrit Utilisation des profils d’expression à l’échelle du génome ob Ramilo et al ont identifié un ensemble de gènes qui distinguent l’infection grippale A des infections bactériennes avec une précision de% -%. En utilisant des ensembles de gènes ou de gènes, ils ont été capables de différencier Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Sur la base de ces données, ils ont généré un microréseau de gènes qui avaient le plus de pouvoir discriminant parmi les pathogènes. Ce tableau a été capable de distinguer les profils d’expression des patients avec une infection respiratoire aiguë par rapport aux témoins sains. Zaas et al ont développé une signature transgénique -gène des infections virales respiratoires aiguës chez les adultes infectés expérimentalement avec des virus respiratoires communs En utilisant cette signature -gène, la réanalyse des données pédiatriques du travail de Ramilo a pu distinguer les enfants avec une infection virale de contrôles sains avec% de précision La grippe A a été distinguée f Les travaux de ces groupes mettent également en évidence une lacune dans le profilage de l’expression génique. Dans le cadre d’infections virales et bactériennes polymicrobiennes ou mixtes, des profils indistincts peuvent être générés, limitant ainsi le risque d’infection par le virus de la pneumonie streptococcique. Tang et al ont généré un profil transgénique transgénique de septicémie qui distinguait la sepsie des SIRS stériles avec une précision de% -%. la majorité de ces études ont montré une régulation positive des récepteurs de reconnaissance de type tels que les récepteurs Toll et CD, ainsi que des voies de transduction du signal incluant le facteur nucléaire kappa B, protéine kinase mitogène et Janus kinase, qui sont impliqués dans la coordination immunitaire immunitaire. En revanche, les niveaux d’expression de la cytokine inflammatoire Des facteurs tels que le facteur de nécrose tumorale et les membres de la famille des interleukines varient d’une étude à l’autre et aucun modèle cohérent n’a été identifié Cette variabilité interétudiante met en évidence certains des défis liés au profilage de l’expression génique dans la sphère clinique. Des tests cliniques prospectifs de grande envergure seront nécessaires pour valider les profils transcriptionnels dans le diagnostic et la surveillance des infections. Des défis significatifs dans la technique de normalisation et l’analyse des données subsistent également avant que le profil d’expression dans les maladies infectieuses ne soit utilisé en clinique. Dans les domaines de l’oncologie, où le profilage transcriptionnel est utilisé pour prédire les résultats chez les patientes atteintes de cancer du sein […] À mesure que la technologie s’améliore, les coûts diminuent et que la connaissance de la biologie leucocytaire augmente, il devient de plus en plus probable que diag cliniquement valable nostic

Spectrométrie de masse à temps de vol avec désorption laser / ionisation assistée par matrice

La spectrométrie de masse à temps de vol par désorption / ionisation laser assistée par matrice MALDI-TOF MS, une méthode à large application en biochimie, protéomique et chimie des polymères, a été récemment adaptée pour l’identification de microorganismes entiers Des plateformes MALDI-TOF MS intégrées et commerciales ont intégré cette technologie dans de nombreux laboratoires de microbiologie clinique européens et américains, où elle a permis d’identifier des organismes provenant de colonies sur des milieux solides ainsi que directement à partir de cultures positives de sang et d’urine [ La technique s’est révélée capable d’identifier avec précision les mycobactéries et les bactéries non fermentantes, organismes qui ont posé des difficultés pour les méthodes conventionnelles Bien que la Food and Drug Administration américaine n’ait encore approuvé aucun système commercial MALDI-TOF MS à usage clinique, cette technologie offre un temps d’exécution amélioré et complète, sinon un jour, l’identification microbiologique conventionnelle Les instruments MSMDIDI-TOF MS ont des composants: une chambre d’ionisation spécimen, un analyseur de masse à temps de vol et un détecteur de particules Figure La préparation des échantillons est simple et consiste à transférer une partie d’une colonie isolée sur une plaque cible. est ensuite recouvert d’une matrice chimique et la plaque cible est chargée dans l’instrument Le mélange échantillon-matrice est pulsé par un laser, convertissant l’échantillon en un gaz ionique composé de petites protéines et de peptides et d’autres molécules dans la chambre d’ionisation. les molécules sont accélérées par un champ électrique à des vitesses qui dépendent de leur rapport masse / charge m / z Les particules quittent alors le champ électrique et entrent dans l’analyseur de masse à temps de vol Le temps nécessaire à une particule pour traverser l’analyseur de masse “Temps de vol” dépend de la vitesse développée dans la chambre d’ionisation, et donc, sur le rapport m / z Les temps de vol des particules individuelles sont mesurés par un détecteur de particules à la fin de l’analyseur de masse, et sont converties en valeurs m / z qui sont tracées sur un spectrogramme de masse Le spectrogramme est ensuite comparé à une bibliothèque par un algorithme propriétaire pour identifier l’organisme

Figure Vue largeTéléchargement Diagramme schématique d’un instrument de spectrométrie de masse à temps de vol à désorption / ionisation laser assistée par matrice L’échantillon est irradié avec un laser et converti en un gaz ionique dans la chambre d’ionisation. Les particules chargées positivement sont accélérées dans un champ électrique puis Traverser l’analyseur de masse à temps de vol avant de heurter un détecteur de particules Le spectrogramme de masse est calculé à partir des temps de vol mesurésFigure Vue largeTélécharger Diagramme schématique d’un instrument de spectrométrie de masse à désorption / ionisation laser assistée par matrice L’échantillon est irradié avec un laser et converti en un gaz ionique dans la chambre d’ionisation Les particules chargées positivement sont accélérées dans un champ électrique puis traversent l’analyseur de masse à temps de vol avant de heurter un détecteur de particules. Le spectrogramme de masse est calculé à partir des temps de vol mesurés. de la technologie MALDI-TOF MS comprennent la facilité d’utilisation, pot automatisation, temps d’exécution rapide et faibles coûts de réactifs La simplicité de configuration et la capacité à exécuter un grand nombre d’isolats par lot confèrent facilement cette technique au flux de production à haut débit et à l’automatisation potentielle. être effectué dans & lt; Cette amélioration du délai d’exécution peut apporter des avantages cliniques substantiels Bien que l’achat d’un instrument MALDI-TOF MS implique un engagement de capital important avec des frais annuels récurrents de contrat de service, les réactifs et les consommables requis sont principalement constitués de cibles. plaques, quantités microlitres de composés organiques peu coûteux, boucles d’inoculation et pointes de pipettes avec des coûts estimés de seulement US $ – $ par identification lorsque optimisé Dans certains cas, ce coût opérationnel est le dixième de celui de l’identification conventionnelle avec plates-formes d’essais biochimiquesDes études multiples comparant MALDI-TOF avec des techniques conventionnelles ont été réalisées en Europe, où au moins un instrument commercial MALDI-TOF a obtenu l’approbation CE Une étude suisse a comparé un système MALDI-TOF MS à des méthodes conventionnelles d’identification isolats de levure dans un laboratoire de microbiologie clinique MALDI-T La MS a fourni des identifications pour% des isolats, y compris% au niveau de l’espèce et% au niveau du genre Des identifications au niveau des espèces,% des identifications conventionnelles appariées Onze pourcent des résultats discordants étaient dus à des erreurs dans l’identification conventionnelle, tandis que le% restant les anomalies étaient dues à des erreurs dans l’identification MALDI-TOF Les déficiences importantes dans les plates-formes actuelles de MALDI-TOF MS incluent la classification erronée de Shigella comme Escherichia coli, et la classification erronée de Streptococcus pneumoniae comme Streptococcus mitis avec un instrument De plus, les instruments actuels MALDI-TOF MS ont démontré performance avec des échantillons polymicrobiens Dans certains cas, les instruments ont identifié seul organisme sans indiquer la présence d’autres Les instruments commerciaux MALDI-TOF devraient évoluer rapidement sous une concurrence intense pour la part de marché des États-Unis, en attendant l’approbation de la FDA. combiner pol La spectrométrie de masse à temps de vol est susceptible d’entrer en concurrence Bien que des améliorations soient possibles, les délais d’exécution rapides, la facilité d’utilisation et les économies potentielles sur les coûts opérationnels rendront la technologie de spectrométrie de masse très populaire aux États-Unis. laboratoires cliniques dans un proche avenir

Aptamères d’acide nucléique

Les aptamères d’acide nucléique sont de courts oligonucléotides monocaténaires qui se lient à une large gamme de cibles avec une affinité et une spécificité élevées. L’utilisation d’oligonucléotides comme sondes d’affinité pour des protéines ou d’autres molécules a été décrite par Tuerk et Gold et Ellington et Szostak. dans un aptamère acide nucléique peut être composé d’ADN ou d’ARN et est typiquement – bases de longueur Aptamères avec une grande affinité et spécificité pour leurs cibles sont sélectionnés dans un processus itératif appelé évolution systématique des ligands par enrichissement exponentiel SELEX Figure L’aptinité des aptamères rivalise et surpasse souvent celle des anticorps Les aptamères ont également un grand pouvoir discriminant A titre d’exemple, un aptamère développé pour la détection de la théophylline est plus spécifique de la théophylline que la caféine, une molécule différente de la théophylline par la présence d’un seul groupe méthyle

réaction en chaîne Ce cycle est répété jusqu’à ce que les oligonucléotides ayant une spécificité et une affinité de liaison suffisamment élevées soient isolés. A travers ce processus, des aptamères avec des constantes de dissociation picomolaire à nanomolaire faible peuvent être obtenues. des acides nucléiques avec une molécule ou une cellule cible; séparer les acides nucléiques liés des acides nucléiques non liés; éluer l’acide nucléique lié de la cible; amplifier les acides nucléiques élues pour générer un pool raffiné d’acides nucléiques; et l’utilisation d’amplicons comme nouveaux pools d’acides nucléiques dans les cycles de sélection suivants. Ce processus est répété jusqu’à ce que des aptamères ayant une spécificité et une affinité élevées pour la cible soient isolées. Abréviations: PCR, amplification en chaîne par polymérase; SELEX, évolution systématique des ligands par enrichissement exponentielFigure View largeTélécharger la lameDéveloppement systématique des ligands par enrichissement exponentiel SELEX, un grand pool d’oligonucléotides aléatoires est incubé avec une molécule cible Lors de la liaison, la courte séquence d’acide nucléique se replie en une structure -dimensionnelle Les acides nucléiques liés sont ensuite élués et amplifiés par réaction en chaîne par polymérase. Ce cycle est répété jusqu’à ce que les oligonucléotides ayant une spécificité et une affinité de liaison suffisamment élevées soient isolés Par ce procédé, on peut obtenir des aptamères à faible constante de dissociation picomolaire à nanomolaire. le processus implique des étapes principales: incubation d’un pool aléatoire d’acides nucléiques avec une molécule ou une cellule cible; séparer les acides nucléiques liés des acides nucléiques non liés; éluer l’acide nucléique lié de la cible; amplifier les acides nucléiques élues pour générer un pool raffiné d’acides nucléiques; et l’utilisation d’amplicons comme nouveaux pools d’acides nucléiques dans les cycles de sélection suivants. Ce processus est répété jusqu’à ce que des aptamères ayant une spécificité et une affinité élevées pour la cible soient isolées. Abréviations: PCR, amplification en chaîne par polymérase; SELEX, évolution systématique des ligands par enrichissement exponentielConventionnellement, les aptamères des acides nucléiques ont été sélectionnés pour des molécules cibles purifiées. En, Hamula et al ont modifié le processus SELEX en utilisant comme cibles des cellules bactériennes vivantes en suspension Cette technique a permis de développer un aptamère. à Lactobacillus acidophilus qui distingue cette bactérie des autres genres bactériens et fongiques Leur travail met en évidence l’une des principales forces de la technologie aptamère, à savoir qu’une cible protéique spécifique n’a pas besoin d’être isolée avant la sélection. Par la suite, ce groupe a utilisé les souches les plus répandues de streptocoque du groupe A comme cibles dans le processus SELEX et a été capable de dériver des aptamères avec une haute affinité et spécificité par rapport à d’autres espèces streptococciques [ ] SELEX à cellules entières a également été utilisé pour dériver aptamers capabl e de distinguer Escherichia coli O: H d’une souche non pathogène d’Escherichia coli Cette technique a également été utilisée in vitro pour identifier un panel d’aptamères capables de distinguer Staphylococcus aureus de Staphylococcus epidermidis Le même panel d’aptamères a ensuite été utilisé pour identifier Staphylococcus aureus Des méthodes similaires SELEX ont été utilisées pour développer des aptamères pour Campylobacter jejuni , Vibrio parahaemolyticus , et plusieurs espèces de Salmonella Un raffinement supplémentaire est nécessaire avant les tests basés sur l’aptamère pour la détection des pathogènes. entrer en clinique; Cependant, étant donné leur grande spécificité et la facilité avec laquelle ils peuvent être modifiés, les aptamères peuvent devenir des réactifs idéaux pour les tests au point de service. En raison de leur pouvoir discriminant élevé, les aptamères ont un potentiel de génotypage et de sérotypage des virus Gopinath et al. aptamère capable de distinguer une grippe HN à sous-type unique d’autres souches grippales, y compris d’autres virus HN Notamment, l’aptamère avait une plus grande affinité pour le virus comparativement à un anticorps disponible dans le commerce qui ciblait la même souche HN. avantages Les oligonucléotides sont facilement synthétisés à l’échelle Ils sont stables et robustes, avec de longues durées de vie et une capacité à résister aux fluctuations de température. Les aptamères peuvent être facilement attachés à une grande variété de fragments de détection. difficulté à concevoir des aptamères contre des cibles hydrophobes non polaires, et le limi Une autre lacune potentielle est que les aptamères des acides nucléiques peuvent être dégradés par des nucléases sériques qui peuvent limiter leur applicabilité dans les diagnostics ex vivo. Malgré ces inconvénients, les aptamères sont des molécules de reconnaissance polyvalentes qui peuvent être conçues pour cibler pratiquement n’importe quel agent pathogène. sont censés trouver une application dans de nombreuses techniques de diagnostic futures

CONCLUSIONS

La résistance aux antimicrobiens est un problème de santé publique mondial croissant qui a un impact considérable sur la morbidité, la mortalité et les coûts des soins de santé. L’incertitude diagnostique a été identifiée comme un facteur déterminant dans la mauvaise utilisation et la surutilisation des antimicrobiens. distinguer les causes infectieuses des maladies non infectieuses sont très nécessaires Nous avons mis en évidence des approches, une sur l’identification précoce et précise de l’agent pathogène, et la seconde sur la réponse de l’hôte aux pathogènes Cette revue identifie plusieurs nouvelles technologies qui ont le potentiel de améliorer l’évaluation des patients atteints de maladies infectieuses présumées et aider à surveiller l’évolution de l’infection et la réponse au traitement Ces technologies progressent, mais des recherches et des essais cliniques supplémentaires sont nécessaires pour établir leur utilisation sûre, appropriée et rentable dans la pratique quotidienne

Remarques

Avis de non-responsabilité Aucun commanditaire commercial n’a participé à la conception et à la réalisation de cette étude, à savoir la collecte, la gestion, l’analyse ou l’interprétation des données; et préparation, décision de soumettre, d’examen ou d’approbation du manuscrit Soutien financier MKM est soutenu par le NIAID NIH T-AI-Conflits d’intérêts potentiels PS a reçu le soutien de BRAHMS et de bioMérieux pour assister aux réunions et a rempli des engagements oraux Tous les autres auteurs rapportent non Conflits potentiels Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent comme pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués