Quantification moléculaire des charges de Gardnerella vaginalis et Atopobium vaginae pour prédire la vaginose bactérienne

Contexte La vaginose bactérienne BV est un problème de santé publique mal identifié associé à l’accouchement prématuré et pour lequel il n’existe aucun outil de diagnostic fiable. Méthodologie L’analyse moléculaire de 231 échantillons vaginaux, classés par score de Nugent à base de Gram, a été utilisée pour proposer des critères moléculaires. Ces critères ont été appliqués prospectivement à 56 nouveaux échantillons Un outil moléculaire quantitatif ciblant 8 micro-organismes BV et un gène humain a été développé en utilisant un test de réaction en chaîne de la polymérase en temps réel et des dilutions en série d’une suspension plasmidique. espèces, Mobiluncus curtisii, Mobiluncus mulieris, et Candida albicans qui peuvent être identifiés par la coloration de Gram, ainsi que Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, et Ureaplasma urealyticum qui ne peuvent pas être détectés par Gram coloration. En utilisant le score de Nugent, 167 échantillons ont été classés comme Normalement, 20 étaient classés BV et 44 étaient classés comme intermédiaires. Excepté U urealyticum, M mulieris et Lactobacillus species, l’ADN des bactéries testées était détecté plus fréquemment dans des échantillons démontrant BV, mais la valeur prédictive d’une telle détection était faible. quantification moléculaire du niveau d’ADN d’A vaginae, ⩾108 copies / mL et G vaginalis DNA le vel, ⩾109 copies / mL avait la valeur prédictive la plus élevée pour le diagnostic de BV, avec une excellente sensibilité de 95%, une spécificité de 99% et des valeurs prédictives positives de 95% et négatives de 99%; 25 57% des échantillons démontrant une flore intermédiaire avaient un profil BV Lorsqu’ils sont appliqués prospectivement, nos critères moléculaires ont des valeurs prédictives positives et négatives totales de 96% et 99%, respectivement. Conclusions Nous rapportons un outil quantitatif hautement reproductible pour analyser objectivement la flore vaginale. valeurs de coupure pour les concentrations de A vaginae et G vaginalis pour établir le diagnostic moléculaire de BV

La vaginose bactérienne BV est un problème de santé publique important qui affecte la flore vaginale normale; Une BV d’étiologie inconnue a été rapportée chez 8% à 40% des femmes fertiles [1, 2] Des preuves croissantes ont associé la BV à la susceptibilité aux maladies sexuellement transmissibles, au travail prématuré et à l’accouchement prématuré [1, 2] Aux États-Unis, où la prématurité est la principale cause de morbidité et de mortalité infantiles, le taux global d’accouchement prématuré est d’environ 11%; parmi la population à risque de BV, le taux d’accouchement prématuré est estimé à 30% et le coût associé est de 1 milliard de dollars par an [2] Par conséquent, la prise en charge médicale de la BV peut aider à réduire le taux d’accouchement prématuré. Cependant, l’examen a révélé des résultats contradictoires pour l’efficacité du dépistage et du traitement de la BV chez les femmes enceintes [3, 4] Les résultats ont été limités par l’hétérogénéité significative des études incluses Un facteur contribuant aux incohérences dans ces études peut être différences dans le dépistage méthodes en raison de l’absence d’un outil de diagnostic standardisé et objectif fiable [3, 4] Le syndrome de BV a d’abord été défini par les critères cliniques de Spiegel et al [5] Cependant, un diagnostic clinique est limité en essayant d’évaluer une population asymptomatique, comme observé pour la moitié des femmes enceintes avec BV [6, 7] Par conséquent, cette approche n’est pas utilisée régulièrement La plupart des articles publiés ont basé le diagnostic de BV sur le Nugent sco re NS [7] Avec cette technique, le diagnostic de BV repose sur une estimation quantitative du nombre de Lactobacillus, de Gardnerella vaginalis et de Mobiluncus morphotypes par la coloration de Gram [8] Actuellement, le NS nécessite une méthode fastidieuse non standardisée, même si la valeur κ est élevée [9-13] Ainsi, les résultats NS dans la catégorie artificielle de la flore intermédiaire correspondent à 8% -22% des échantillons; cependant, cette catégorie reste non caractérisée [6, 14-16] Enfin, cette méthode ne permet pas d’identifier plusieurs bactéries impliquées dans BV, telles que les espèces Mycoplasma, dépourvues de paroi cellulaire, et Atopobium vaginae, qui présente une morphologie variable, conduisant à une erreur d’identification [17, 18] L’implication de BV dans les issues de grossesse soutient le besoin urgent d’un diagnostic précis Notre objectif était de proposer des valeurs limites objectives pour la définition de BV dans une étude à 2 phases: 1 développement et 2 validation , un outil moléculaire quantitatif ciblant 8 microorganismes et l’albumine humaine a été développé à l’aide d’un dosage quantitatif PCR quantitative en temps réel et de dilutions successives d’une suspension plasmidique. Cette stratégie a été utilisée par notre équipe pour détecter des agents potentiels du bioterrorisme [19] papillomavirus humain [20] Les critères moléculaires quantitatifs pour prédire BV ont été déterminés en utilisant le NS comme référence

Patients, matériaux et méthodes

Les patients

Phase de développement Au total, 231 échantillons vaginaux ont été prélevés de manière prospective auprès de 204 femmes lors d’un suivi de grossesse à l’Hôpital Universitaire de Conception de Marseille France de juin 2005 à avril 2006. Vingt et une femmes ont obtenu un échantillon après prélèvement éclairé. ont été prélevés chez des patients symptomatiques et asymptomatiques Des échantillons vaginaux ont été utilisés soit pour le dépistage de la BV pendant le premier trimestre chez les patients prématurés, soit pour le dépistage de Streptococcus agalactiae au cours du troisième trimestre Après mise en place d’un spéculum non lubrifié dans la voûte vaginale a été réalisée avec 2 cytobrushes stériles tournés contre le scrinet de la paroi vaginale, 55 mm; Laboratoire CCD International Un échantillon de 1 cytobrush a été roulé sur une lame de verre pour la coloration de Gram. Le second cytobrush a été transféré dans un tube stérile contenant 500 μL de BME Baral Medium Gibco pour extraction d’ADN et conservé à -80 ° C jusqu’à utilisation. nouvelle cohorte de 56 femmes enceintes au CHU de Marseille France, 56 prélèvements vaginaux ont été collectés prospectivement de mai à juin 2007 avec la technique décrite ci-dessus

Nugent Score

Une coloration de Gram a été effectuée sur les échantillons de frottis vaginaux en utilisant un dispositif de coloration automatisé modèle 7320 Aerospray Gram Slide Stainer; et les échantillons ont été classés, selon le NS [8], comme démontrant une flore normale, une flore intermédiaire ou BV L’évaluation a été réalisée indépendamment par 2 investigateurs qui n’étaient pas au courant des résultats des autres résultats discordants ont été examinés jusqu’à un consensus

Construction d’outils moléculaires

Neuf séquences d’ADN ciblant 8 micro-organismes Lactobacillus, G vaginalis, Mobiluncus curtisii, Mobiluncus mulieris, Ureaplasma urealyticum, A vaginae, Candida albicans et Mycoplasma hominis et un gène humain ont été analysées par qPCR quantification du gène de l’albumine humaine a été utilisé comme un contrôle interne pour fournir Les cibles d’ADN, les amorces, les séquences de sondes et les oligonucléotides utilisés pour la qPCR sont présentés dans le tableau 1. Les amorces et les oligonucléotides ont été synthétisés par Eurogentec et les sondes ont été synthétisées par Applied Biosystems Duplex Les réactions qPCR ont été réalisées en double fluorescence sonde marquée FAM et sonde VIC marquée pour 8 cibles table 2 Seule 1 hominis M cible a été quantifiée seule La spécificité des amorces et des sondes a été contrôlée par analyse BLAST, et les amorces et sondes ont été testées contre des souches spécifiques de chaque microorganisme analysé dans cette étude et contre 40 espèces bactériennes supplémentaires tableau 3 sur le fragment nucléotidique contenant les 9 cibles d’ADN et le plasmide de quantification est présenté dans la [Annexe en ligne seulement [Annexe

Tableau 1Voir les cibles slideDNA de largeDownload selon GenBank et les séquences nucléotidiques des amorces et des sondes utilisées pour la PCR quantitative en temps réel 1Voir les cibles slideDNA de largeDownload selon GenBank et les séquences nucléotidiques des amorces et des sondes utilisées pour la PCR quantitative en temps réel

Tableau 2View largeTélécharger des volumes et des concentrations optimaux d’amorces et de sondes utilisées pour la PCR quantitative en temps réel, pour obtenir la même sensibilité et la même quantification en temps réel simplex et duplex RTTable 2View largeTélécharger des volumes et des concentrations d’amorces et de sondes PCR en temps réel, pour obtenir la même sensibilité et la même quantification en PCR quantitative en temps réel simplex et duplex

Tableau 3View largeDownload slideMicroorganismes utilisés pour tester la sensibilité et la spécificité de chaque PCR quantitative en temps réel ciblant les 8 microorganismesTable 3View largeTélécharger les microorganismes utilisés pour tester la sensibilité et la spécificité de chaque PCR quantitative en temps réel ciblant les 8 microorganismes

Analyse d’échantillons vaginaux à l’aide d’outils moléculaires

Extraction de l’ADN Deux cents microlitres de chaque suspension vaginale homogénéisée ont été utilisés pour la purification d’ADN avec le QIAamp DNA Mini Kit Qiagen, qui a été modifié comme décrit ailleurs [20] qPCR Le test qPCR a été réalisé avec un Stratagene MX 3000P. 50 ° C pendant 2 min et à 95 ° C pendant 15 min, suivi de 45 cycles à 95 ° C pendant 30 s et à 60 ° C pendant 1 min. Cinq microlitres de 1 un échantillon d’ADN pur non dilué, 2 un échantillon d’ADN dilué à 1 × 10 μL, 3 un échantillon d’ADN dilué à 1 × 100 μL, ou 4 la suspension plasmidique diluée en série a été ajoutée au mélange PCR de 20 μl contenant le mélange Quantitect Probe PCR Kit Qiagen, les 2 couples d’amorces, les 2 les sondes 1 marquées “FAM” et 1 marquée “VIC”, et 100 U Uracil ADN glycosylase Sigma-Aldrich Des témoins négatifs ont été introduits dans chaque plaque de réaction. Les résultats finaux ont été exprimés en copies d’ADN de microorganismes par 1 ml de suspension vaginale. multipliant le nombre En effet, 5 μL d’ADN ont été prélevés sur 100 μL d’ADN éludé, ce qui correspond à l’ADN contenu dans 200 μL de suspension d’échantillon vaginal

Analyses statistiques

La distribution quantitative des microorganismes dans la flore démontrant la BV et la flore normale a été analysée à l’aide du test U de Mann-Whitney dans EpiInfo, version 604a Centers for Disease Control et Prevention L’expression différentielle était statistiquement significative lorsque P & lt; les valeurs pour la définition de BV, la sensibilité et la spécificité de la NS ont été déterminées Pour les résultats les plus importants, IC à 95% ont été calculés en utilisant le calculateur bayésien UBC de type 2 [22]

Résultats

Validité de la méthode PCR Les conditions de la qPCR duplex ont été ajustées Les quantités optimales d’amorces et de sondes sont indiquées dans le tableau 1 sildenafil. Les valeurs de seuil de cycle pour la courbe standard ont varié de 17 107 copies à 37 1 copies et la pente a varié de -32 à -35 La linéarité est restée excellente. Toutes les solutions d’échelle plasmidique ont été testées en double. Les résultats étaient hautement reproductibles. Ils ont permis une limite de détection inférieure pour tous les microorganismes de 10 copies par 5 μL de données d’échantillon non montrées. et dilué à 1 × 10 μL et 1 × 100 μL Les valeurs CT ont une excellente reproductibilité et linéarité Enfin, l’interprétation de la quantification microbienne n’a été réalisée que s’il y avait une plage étroite de valeurs pour le nombre de copies d’albumine dans les échantillons vaginaux. 231 échantillons, les valeurs de CT pour le niveau d’albumine ont varié de 19 à 22 copies pour 5 μL de l’échantillon 106-105 copies par 5μL de l’échantillon Ainsi, aucun des échantillons n’était ex Dix-sept anomalies 74% parmi les 231 échantillons ont été observés pour un faible nombre de Lactobacillus en raison de la difficulté d’attribuer un petit bâtonnet Gram positif aux morphotypes de Lactobacillus. Après consensus, sur les 231 échantillons, 167 72% ont été catégorisés comme démontrant une flore normale, 20 9% ont été catégorisés comme présentant une BV, et 44 19% ont été catégorisés comme démontrant une flore intermédiaire Comparaison PCR quantitative entre BV et flore normale Les résultats PCR pour des échantillons démontrant BV et une flore normale, comme déterminé par NS, sont montrés dans les figures 1 et 2 et dans le tableau 4, PCR était positive pour A vaginae plus souvent P1 001 pour des échantillons démontrant BV 19 de 20 échantillons que pour des échantillons présentant une flore normale 116 de 167, avec une valeur prédictive positive faible PPV de 14% pour diagnostic BV le profil des résultats a été observé pour la PCR pour G vaginalis PPV, 19%; 19 des 20 échantillons démontrant BV contre 79 sur 167 échantillons démontrant une flore normale; P <001, PCR pour M curtisii PPV, 38%; 13 échantillons sur 20 contre 21 échantillons sur 167; P <001, et PCR pour M hominis PPV, 31%; 10 échantillons sur 20 contre 22 échantillons sur 167; Par contre, les résultats de la PCR pour les espèces Lactobacillus étaient positifs moins fréquemment P = 007 pour les échantillons démontrant BV 12 sur 20 échantillons que pour les échantillons démontrant une flore normale 141 sur 167, avec un PPV faible 8% Aucune différence statistiquement significative n'a été observée entre échantillons démontrant une BV et des échantillons démontrant une flore normale avec utilisation de la PCR pour les albicanes C P = 11 et PCR pour U urealyticum P = 14 Aucun échantillon démontrant une BV ou une flore normale étaient positifs pour M mulieris par PCR

Figure 1View largeDownload slideScattergram montrant la concentration microbienne selon la quantification PCR en temps réel pour 20 échantillons démontrant la vaginose bactérienne gauche et 167 échantillons démontrant la flore vaginale normale à droite, comme déterminé par Nugent scoreFigure 1View largeDownload slideScattergram montrant la concentration microbienne selon la quantification PCR en temps réel pour 20 des échantillons démontrant une vaginose bactérienne à gauche et 167 échantillons démontrant une flore vaginale normale à droite, tel que déterminé par le score de Nugent

Figure 2View largeDownload slidePourcentage de la flore avec la ligne pointillée Gardnerella vaginalis, la ligne continue Atopobium vaginae et la ligne pointillée Lactobacillus, selon les seuils quantifiés dans 167 échantillons démontrant une flore vaginale normale grise et 20 échantillons démontrant une vaginose bactérienne noireFigure 2Voir grandDownloadParier de la flore avec Gardnerella vaginalis ligne pointillée, ligne continue d’Atopobium vaginae, et ligne pointillée des espèces Lactobacillus, selon les quantifications de seuil dans 167 échantillons démontrant une flore vaginale normale grise et 20 échantillons démontrant une vaginose bactérienne noire

Tableau 4View largeDownload slide Résultats quantitatifs et analyses moléculaires pour 167 échantillons démontrant une NVF normale de la flore vaginale et 20 échantillons démontrant une vaginose bactérienne BV, tel que déterminé par le Nugent scoreTable 4View largeTélécharger les résultats moléculaires et l’analyse pour 167 échantillons démontrant une flore vaginale normale et 20 échantillons bactériens vaginose BV, tel que déterminé par le score de NugentqPCR comparaison entre des échantillons démontrant BV et des échantillons démontrant une flore normale Les concentrations médianes de vagins, G vaginalis, M curtisii et M hominis étaient significativement plus élevés dans des échantillons démontrant BV que dans des échantillons démontrant une flore normale, tandis que La concentration médiane des espèces de Lactobacillus était significativement plus faible dans les échantillons démontrant une BV que dans les échantillons démontrant une flore normale. Figure 1 Pour optimiser les techniques moléculaires pour la pratique de routine, une quantification ajustée était requise figures 2 et 3 Un niveau d’ADN vaginal ⩾108 copies / mL avait une excellente sensibilité 90%, spécificité 99%, valeur prédictive négative 99%, et PPV 95% pour le diagnostic de BV Pour une quantification seuil de G vaginalis ADN, une concentration ⩾109 copies / mL Cependant, la valeur prédictive négative de 94% et la VPP de 100% sont restées élevées. Pour une quantification seuil de l’ADN de M curtisii, une concentration de ⩾105 copies / mL était requise, et la sensibilité et la spécificité étaient respectivement de 45% et 100% Pour une quantification seuil de l’ADN de M hominis, une concentration de ⩾106 copies / mL était requise, et la sensibilité et la spécificité étaient de 30% et 99% respectivement. d’espèce Lactobacillus était prédictif de la flore normale En effet, le seuil de quantification de la concentration d’ADN de Lactobacillus ⩾108 copies / mL avait une haute spécificité de 100% et une sensibilité modérée de 44% pour la flore normale Parmi les 20 échantillons BV en démonstration, 19 avaient un niveau d’ADN d’A vaginae ⩾108 copies / mL ou un niveau d’ADN G vaginalis ⩾109 copies / mL En outre, 9 avaient un niveau d’ADN A vaginae ⩾108 copies / mL et un niveau d’ADN G vaginalis ⩾ 109 copies / mL

Figure 3View largeDownload slideReceiver courbes de fonctionnement ROC pour les comptages moléculaires bactériens utilisés pour prédire la vaginose bactérienne Plus l’aire sous la courbe est proche de 10, plus les comptes bactériens prédisent la vaginose bactérienne Atopobium vaginae A et Garnerella vaginalis B compte le meilleur pouvoir prédictif vaginose bactérienne C, espèces de Lactobacillus ROC courbe D, courbe ROC de Mobiluncus curtisii, courbe de ROC de Mycoplasma hominis, courbe ROC d’Ureaplasma urealyticumFigure 3View largeTélécharger la diapositiveCaractéristique de fonctionnement du récepteur ROC pour les comptes moléculaires bactériens utilisés pour prédire la vaginose bactérienne Plus l’aire sous la courbe est étroite à 10, meilleurs sont les comptes bactériens prédisant la vaginose bactérienne Atopobium vaginae A et les comptes de Garnerella vaginalis B ont le meilleur pouvoir prédictif pour la vaginose bactérienne C, Lactobacillus espèces ROC courbe D, Mobiluncus curtisii ROC courbe E, Mycoplasma hominis ROC courbe F, Ureaplasma urealyticum ROC curvePredictive q Critères quantitatifs pour BV La combinaison d’un niveau d’ADN A vaginae ⩾108 copies / mL et d’un niveau d’ADN G vaginalis ⩾109 copies / mL a démontré les meilleurs critères prédictifs pour le diagnostic BV, avec une excellente sensibilité 95%, spécificité 99%, prédictive négative valeur 99%, et VPP 95% Profil moléculaire de la flore intermédiaire Trente-et-un 70% des 44 échantillons démontrant une flore intermédiaire étaient positifs pour G vaginalis par PCR et 12 27% des 44 échantillons avaient un niveau d’ADN G vaginalis ⩾109 copies / Trente-sept 84% des 44 échantillons démontrant une flore intermédiaire étaient positifs pour A vaginae par PCR, et 24 55% des 44 échantillons avaient un niveau d’ADN A vaginae ⩾108 copies / mL En utilisant les deux tests de quantification, 25 57% des 44 échantillons avaient un niveau d’ADN A vaginae ⩾108 copies / mL et / ou un niveau d’ADN G vaginalis ⩾109 copies / mL Phase de validation Selon la NS des 56 femmes enceintes, 39 696% étaient considérés comme ayant une flore normale, 7 125% ont été considérés comme ayant une BV, et 10 179% ont été considérés o Avoir une flore intermédiaire La qualité et la reproductibilité des résultats de la PCR ont été validées comme décrit dans Patients, Matériels et Méthodes Selon les critères quantitatifs pour la BV, 11 des 56 femmes étaient considérées comme ayant un BV Sur la base des NS de ces 11 femmes, 7 étaient considérés comme ayant une BV, et 4 étaient considérés comme ayant une flore intermédiaire Aucun des échantillons démontrant une flore normale n’était considéré comme présentant une BV sur la base des critères moléculaires

Discussion

La bactérie a été détectée par PCR chez 96% des patients avec BV et seulement chez 12 à 19% de ceux avec flore normale [17, 23, 27]. Nos données confirment l’implication de A vaginae dans BV; cependant, nous avons détecté cette bactérie dans une plus grande proportion 69% des échantillons classés comme démontrant une flore normale [23, 27] Ceci suggère que la simple détection de A vaginae a une faible valeur prédictive; cependant, nos résultats suggèrent également que la quantification de A vaginae est un bon prédicteur de BV Cela contredit les résultats de l’étude de Bradshaw et al [23], dans laquelle la détection de A vaginae était plus prédictive de BV que la détermination d’un seuil Cette différence entre notre étude et celle de Bradshaw et al [23] peut être liée aux différences entre les caractéristiques épidémiologiques et / ou les tests de PCR Origine géographique et / ou ethnique, état de grossesse, risques de MST et prévalence de BV dans la population étudiée par Bradshaw et al [23] ont été montré pour influencer le taux de vagins dans la flore vaginale paramètres techniques de PCR, tels que la cible d’ADN, influencer directement la sensibilité des tests PCR Par exemple, il a été clairement démontré que la longueur de la même cible ADN de ~ 250 paires de bases augmente la sensibilité du test de PCR de 24% à 39% [28, 29] Parce que notre cible d’ADNr 16S pour la longueur du vagin, 86 paires de bases était plus courte que celle utilisée par Bradshaw et al [23] longueur, 430 paires de base, nous pouvons supposer que notre outil moléculaire est plus sensibleG vaginalis est une bactérie bien connue qui a été impliquée dans BV Nos résultats sont concordants avec les approches moléculaires précédentes La flore normale est dominée par un nombre limité d’espèces de Lactobacillus, comme le Lactobacillus gasseri, le Lactobacillus crispatus, le Lactobacillus jensenii et le Lactobacillus iners, qui peuvent être détectés chez un grand nombre de patients atteints de BV [10, 23, 24]. par notre dosage [17, 27] La ​​diminution de la quantité d’espèces de Lactobacillus est l’une des principales caractéristiques décrites dans BV [8, 30]; cette découverte a été confirmée par des approches moléculaires [10, 24] M curtisii et M mulieris ont également été impliqués dans BV et sont inclus dans la NS [30-32] Dans notre étude, M curtisii a été associée à BV, tandis que la quantité de M mulieris n’a pas augmenté même chez la flore normale. M hominis n’est pas inclus dans la NS Cependant, une augmentation de la concentration de cette bactérie, contrairement à U urealyticum, est associée à BV [10, 30, 33]. étude, nous avons démontré que la quantification de plusieurs microorganismes permet un diagnostic moléculaire de BV En fait, il y avait un équilibre notable entre la charge de Lactobacillus et les charges A vaginae et G vaginalis La coexistence de A vaginae et G vaginalis a été récemment documentée dans 78 % -96% des échantillons démontrant BV, alors que cette association n’était présente que dans 5% -10% des échantillons démontrant une flore normale [17, 23, 26] Nous avons également trouvé des concentrations élevées des deux bactéries dans les échantillons.est encore plus spécifique que G vaginalis dans BV, comme suggéré par Bradshaw et al [23] Enfin, nous avons démontré que la combinaison d’un niveau d’ADN A vaginae ⩾108 copies / mL et un niveau d’ADN G vaginalis ⩾109 copies / mL était le meilleure définition diagnostique de la flore BV intermédiaire, soit une étape de transition entre la flore normale et la BV [26] ou une flore hétérogène incluant la BV et la flore normale [11, 15, 16] Récemment, les essais PCR ont permis de mieux comprendre la flore intermédiaire, suggérant un profil plus proche de celui de BV [23] En effet, la majorité des échantillons démontrant une flore intermédiaire avaient G vaginalis 92% des échantillons, un vagin 78%, ou les deux organismes 75% détectés [23] Dans notre étude, près d’un- La moitié des échantillons démontrant une flore intermédiaire satisfaisait aux critères quantitatifs utilisés pour définir BV, confirmant le caractère hétérogène de la flore intermédiaire. Ces données suggèrent également que la NS manque sévèrement de sensibilité, comparé au test qPCR utilisé dans notre étude. peut être expliqué par le fait qu’un vagin, qui est significativement associé à BV, n’a pas pu être détecté en utilisant la coloration de Gram et NSThere y avait quelques limitations dans notre étude Le spectre des microorganismes ciblés – même si ceux testés sont significatifs dans BV – était étroit La population recrutée provenait de seulement deux sites en France Les résultats de notre étude pourraient dépendre des patients étudiés et ne pas s’appliquer aux femmes enceintes d’autres origines ethniques ou aux femmes non enceintes Enfin, cette approche moléculaire du diagnostic BV peut sembler complexe; Cependant, une stratégie moléculaire similaire existe déjà pour le diagnostic de l’infection par streptocoque du groupe B au point de traitement [34, 35] Nous rapportons une méthode moléculaire fiable pour analyser objectivement la flore vaginale Actuellement, aucun outil standardisé n’existe pour le diagnostic BV. permettra de réaliser des études cliniques, randomisées, thérapeutiques et internationales

Remerciements

Nous remercions Melanie Ihrig pour avoir révisé le manuscrit; les Crédits Ministériels Projet Hospitalier de Recherche Clinique 2006 Caractérisation et Impact des Anomalies de la Flore Aaginale Chez la Femme Enceinte; et Drs Antoine, Baytur, Bongain, Boulvain, Carbonne, Chauveaux, Closset, Coulon, Decebal, Denoual, Fernandez, Fournie, Jurouk, Gamad, Garbin, Gatterer, Haddad, Horovitz, Hourdin, Ceausu, Fouda, Kalis, Langer, Lavergne, Lopez, Madelenat, Magnin, Maillet, Maisonneuve, Marchesini, Megid Ali, Ohl, Peintinger, Perrotin, Perschler, Picone, Pierre, Prettenhofer, Raudrand, Schaub, Souamés, Subtil, Van Mieghem, Vayssière et Vandittelli, pour leur contribution à l’explication leur stratégie actuelle utilisée pour le diagnostic de la vaginose bactérienne Programme de soutien financier Hospitalier de Recherche Clinique 2006 Conflits d’intérêts potentiels L’Université de la Méditerranée a déposé un brevet sur cette étude dont les auteurs sont les inventeurs